2. 用去離子水將濃縮洗滌液(10X)、濃縮稀釋液(10X)，進行 10 倍稀釋。
3. 取出包被的微量酶標板，并做好陰、陽性對照品和樣品的加樣位置的標記。
4. 準備動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
六、實驗過程
1.取準備好的血清按照以下方式進行加樣。
? 50 uL 陰性對照（NC）加入孔 A1 和 B1。
? 50 uL 陽性對照（PC）加入孔 C1 和 D1。
? 50 uL 待測樣本加入剩余其他孔。
2.輕輕振勻孔中樣品(注意勿溢出)，貼上封板膜，室溫（21℃±5℃）下孵育 2 h。
3.小心揭掉封板膜，棄去孔中液體，300uL 洗滌液清洗 2 次。每一次洗滌后，棄去孔中液體，最后一次清洗完
后，在吸干材料上用力拍干孔內液體。在每一次洗滌和加入下一個試劑之前，避免孔壁變干，影響實驗結果。
4.濃縮酶標記抗體（10X）用稀釋緩沖液（1X）進行 10 稀釋（1 份濃縮液+9 份稀釋緩沖液），吸取 100 uL 稀
釋好的酶標抗體，加入孔中。
5.室溫(21℃±5℃)下孵育 30 min，倒掉孔中液體，300 uL 洗滌液清洗 3 次。
6.將底物 A 與底物 B 按照體積比例 1:1 混合，輕輕旋轉或振蕩均勻后吸取 100 uL 配置好的底物溶液，加入孔
中，避光孵育 20 min。(底物溶液需現配現用)
7.吸取 50 uL 終止液加入孔中，終止反應。
8.酶標儀檢測條件設置成波長 450nm 進行讀數。
七、實驗有效性判斷
在下列情況下，即可判斷實驗有效：
?陰性對照平均 OD 大于 0.7 ODNC>0.7
?陽性對照平均 OD 小于陰性對照平均 OD 的 30% ODPC/ODNC<0.3
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