使用步驟

使用前請(qǐng)先在漂洗液 Buffer PW 中加入 12 mL 無(wú)水乙醇。1.將單一的目的 DNA 條帶從瓊脂糖凝膠中切下 (盡量切除多余部分)放入干凈的離心管中，稱取凝膠重量(去除空管重量)，100 mg凝膠等同于 100 L體積，作為一個(gè)凝膠體積注:若回收的 DNA 片用于克隆，須避免紫外照射損傷 DNA。盡量減少紫外暴露時(shí)間。

2.向膠塊中加入 1 倍體積 Buffer PE(如果凝膠重為 0.1g，則加入100 uL Buffer PE)。50-60C水浴溶膠5-10 min，期間溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，以確保膠塊充分溶解。(若膠塊的體積過(guò)大，可事先將膠塊切成碎塊。)

3.將上一步所得溶液加入一個(gè)吸附柱中，室溫放置 1min，12,000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。注:吸附的容量為750L，若上步得到的液大于 750L，可分批加入。

4.在吸附柱中加入 300 uL Buffer PE，12,000 rpm 離心 1 min，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。

5.在吸附柱中加入 700 uL Bufer PW(確認(rèn)已加入無(wú)水乙醇)，12,000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放回收集管中。

6.重復(fù)一次步驟 5。

7.吸附柱放回收集管后，12.000 rpm 離心 2 min，盡量除盡漂洗液注意:可將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以防止殘留的乙醇影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切PCR等)實(shí)驗(yàn)。

8.將吸附柱放入干凈的 1.5 mL 離心管中，開(kāi)蓋室溫靜置 5 min。向吸附膜中間位置加入 30 uL Buffer PB 或 ddHO (洗脫液應(yīng)先放置于水浴鍋中預(yù)熱) ，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心2 min，收集DNA 溶液。

注意:洗脫體積不應(yīng)小于30 l，體積過(guò)少影回收率。為了提高 DNA 的回收量，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，12,000 rpm 離心 2 min，將DNA 液收集到離心管中。回收大于3 KB 片，建議 BuflerPB 預(yù)熱至55 C以提升回收效率。DNA 也可以用 ddH0 洗脫。DNA 產(chǎn)應(yīng)保存在-20C以防DNA 降解。