產(chǎn)品介紹

轉(zhuǎn)染級(jí)線性聚乙烯亞胺（MW40000）是一種基于聚乙烯亞胺的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品，具有較高的轉(zhuǎn)染效果。聚乙烯亞胺是一種具有高陽(yáng)離子電荷的有機(jī)大分子聚合物，容易結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子，形成帶正電荷的復(fù)合物。該復(fù)合物與細(xì)胞表面陰離子結(jié)合，通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。該轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞毒性低，適用于多種細(xì)胞系，廣泛應(yīng)用于重組蛋白、AAV等的生產(chǎn)。

與MW25000的轉(zhuǎn)染試劑相比，MW40000轉(zhuǎn)染試劑溶解性好，可直接在水中溶解，無(wú)需調(diào)節(jié)酸堿性助溶；操作更簡(jiǎn)便，轉(zhuǎn)染效果好。

基本信息

使用說(shuō)明

試劑配置

所需材料：

去離子水或以上生物級(jí)水、1 mol/L*（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空無(wú)菌過(guò)濾器、無(wú)菌HDPE或聚丙烯儲(chǔ)存瓶。

儲(chǔ)存液配置：

⑴ 將1 g轉(zhuǎn)染級(jí)線性聚乙烯亞胺（MW40000）溶解于900 mL去離子水中，在磁力攪拌器上攪拌均勻至溶解；

⑵ 用1 mol/L*調(diào)整pH至6.9~7.1（如pH大于7.1，用鹽酸將pH值調(diào)整至6.9~7.1）；

⑶ 將溶液轉(zhuǎn)入量筒（或量杯）內(nèi)，加水定容至1 L；

⑷ 用一次性0.2 µm過(guò)濾器真空過(guò)濾除菌，即得到1 mg/mL的儲(chǔ)存液；

⑸ 可根據(jù)需要分裝儲(chǔ)存液，儲(chǔ)存在4℃可保存1個(gè)月。

轉(zhuǎn)染操作流程

接種細(xì)胞：為了提高轉(zhuǎn)染效率，建議在轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度在70~80%為宜；

準(zhǔn)備DNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物：

⑴ 將DNA、轉(zhuǎn)染試劑和稀釋劑先回復(fù)至室溫；

⑵ 用適合的無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋適量DNA；

⑶ 按照一定比例（每1 μg DNA需用1-5 μL轉(zhuǎn)染試劑，建議自行摸索配比），將稀釋后的轉(zhuǎn)染試劑滴加至裝有DNA溶液的試管（勿顛倒添加順序），一邊輕輕渦旋，充分混勻，室溫靜置10~25分鐘孵育。

轉(zhuǎn)染細(xì)胞：

⑴ 在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除細(xì)胞培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基；

⑵ 細(xì)胞中加入適量DNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物，輕輕混勻，轉(zhuǎn)染6-8小時(shí)后，更換新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)基；

⑶ 在合適條件中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染后24小時(shí)即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)（可自行確定適合的檢測(cè)時(shí)間）。

運(yùn)輸及儲(chǔ)存條件

運(yùn)輸條件：室溫運(yùn)輸

保存條件：粉末在室溫或4℃保存，有效期2年。

注意事項(xiàng)

1. 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞，每1 μg DNA使用3 μL轉(zhuǎn)染試劑能獲得較高轉(zhuǎn)染效率，也可嘗試每1 μg DNA使用1.5~4 μL轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

3. 本產(chǎn)品僅作科研用途。